蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細胞

  蜀科臺式低速離心機操作簡單、運行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠，廣泛應用于，放射免疫、生物化學、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領域。今天來科普一下如何用蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細胞，給各位實驗室的朋友參考。
 

1.先將受體大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中活化，置于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。。。

2.接著取一丁點（槍頭沾一下）上述大腸桿菌培養(yǎng)物菌落接種于3-5毫升LB試管中，于恒溫振蕩器上，37℃振蕩培養(yǎng)過夜（約12-16 小時）。

4.再是用移液管無菌條件下，取過夜培養(yǎng)液1 毫升，接種于新鮮的LB 中（100毫升LB/250毫升三角瓶，接種量按菌液濃度而定，一般在1%左右），于恒溫振蕩器上37℃培養(yǎng)2―3 小時。

5.無菌條件下將上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中（離心管應帶蓋并高壓滅菌過），每組2支。

6、帶菌液的離心管置于冰上10 分鐘，冷卻菌液，平衡好，置于蜀科臺式低速離心機上，3500r/min 離心5 分鐘。

7、無菌條件下，倒去上清LB，倒斜離心管，讓LB 流干，留下沉淀菌體，加入預冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升，用微量取樣器輕輕吸沖底部沉淀菌體，使其懸浮后，把2支管轉為1支，搖勻后于冰浴中放置30分鐘。

8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺式低速離心機上，3500r/min離心10分鐘，小心側倒掉上清CaCl2 ，留沉淀菌體。

9、再把菌體懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中，置于冰上作為轉化的受體菌液。此制備的感受態(tài)細胞應在此步后1小時24小時內(nèi)使用，效率比較高。

10.在事先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 儲液和4μl IPTG儲液,用無菌玻棒將溶液涂勻,置于37℃下放置3-4小時,使培養(yǎng)基表面的液體*被吸收，備用。

  上面的應用對大家有幫助嗎？操作中的蜀科TD-5Z臺式低速離心機榮獲2016“國產(chǎn)好儀器”殊榮，是國內(nèi)各大實驗室、、生物科技、食品環(huán)保等單位*的儀器。如果您也有需要，趕快吧！