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蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細胞

更新時間:2017-08-01      點擊次數(shù):4457

  蜀科臺式低速離心機操作簡單、運行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠,廣泛應用于,放射免疫、生物化學、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領域。今天來科普一下如何用蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態(tài)細胞,給各位實驗室的朋友參考。
 

1.先將受體大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中活化,置于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。。。

2.接著取一丁點(槍頭沾一下)上述大腸桿菌培養(yǎng)物菌落接種于3-5毫升LB試管中,于恒溫振蕩器上,37℃振蕩培養(yǎng)過夜(約12-16 小時)。

4.再是用移液管無菌條件下,取過夜培養(yǎng)液1 毫升,接種于新鮮的LB 中(100毫升LB/250毫升三角瓶,接種量按菌液濃度而定,一般在1%左右),于恒溫振蕩器上37℃培養(yǎng)2―3 小時。

5.無菌條件下將上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中(離心管應帶蓋并高壓滅菌過),每組2支。

6、帶菌液的離心管置于冰上10 分鐘,冷卻菌液,平衡好,置于蜀科臺式低速離心機上,3500r/min 離心5 分鐘。

7、無菌條件下,倒去上清LB,倒斜離心管,讓LB 流干,留下沉淀菌體,加入預冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升,用微量取樣器輕輕吸沖底部沉淀菌體,使其懸浮后,把2支管轉為1支,搖勻后于冰浴中放置30分鐘。

8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺式低速離心機上,3500r/min離心10分鐘,小心側倒掉上清CaCl2 ,留沉淀菌體。

9、再把菌體懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中,置于冰上作為轉化的受體菌液。此制備的感受態(tài)細胞應在此步后1小時24小時內(nèi)使用,效率比較高。

10.在事先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 儲液和4μl IPTG儲液,用無菌玻棒將溶液涂勻,置于37℃下放置3-4小時,使培養(yǎng)基表面的液體*被吸收,備用。

 

  上面的應用對大家有幫助嗎?操作中的蜀科TD-5Z臺式低速離心機榮獲2016“國產(chǎn)好儀器”殊榮,是國內(nèi)各大實驗室、、生物科技、食品環(huán)保等單位*的儀器。如果您也有需要,趕快吧!

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